| 由于PsbA（D1）蛋白质的生物学特性，在样品中可以观察到许多降解产物，并且在使用抗PsbA抗体时可以观察到这些降解产物，包括表观分子量为24kDa和16kDa的产物。D1降解是一组复杂的事件，观察到的产物可能受到提取程序和收获前细胞生理学的影响。D1和细胞色素b559之间可能发生交联，使蛋白质在凝胶中的位置升高。在蓝藻（PCC7942）中，通过将抗体与PsbA游离肽预孵育，三条不同的条带竞争，表明所有条带确实是PsbA及其前体或分解产物。还对菠菜和衣藻进行了竞争分析，确认了PsbA条带的身份。
抗PsbA抗体不会检测D2蛋白，因为用于产生PsbA抗体的肽与D2序列没有同源性。艾美捷 PsbA|D1 protein of PSII应用实例：
不同数量的PsbA蛋白质标准品（AS01 016S）250 fmol（1）、125 fmol（2）、62.5 fmol（3）、31.25 fmol（4）、15.625 fmol（5）和2µg总蛋白，从使用蛋白质提取缓冲液PEB（AS08 300）提取的Med4（6,7）中提取。样品用1X样品缓冲液（NuPAGE LDS样品缓冲液（Invitrogen））稀释，补充50 mM DTT，在70°C下加热5分钟，并在装载前保持在冰上。蛋白质样品在4-12%的Bolt Plus凝胶、LDS-PAGE上分离，并使用罐转移法在PVDF上吸附70分钟。在室温下搅拌2%封闭剂或5%非脂肪乳（溶解于20 mM Tris、137 mM氯化钠pH 7.6和0.1%（v/v）吐温-20（TBS-T）中）1小时后，立即封闭印迹。在室温下搅拌，以1:10000的稀释度（在封闭试剂中）在一级抗体中培养印迹1h。倾析抗体溶液，短暂冲洗印迹两次，然后在室温下搅拌，用TBS-T清洗1x15分钟和3x5分钟。将印迹在二级抗体（山羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物，推荐二级抗体AS09 602，Agrisera）中培养，在室温下搅拌，在封闭试剂中稀释至1:25 000，持续1h。按上述方法清洗污渍。根据制造商的说明，使用化学发光检测试剂开发印迹。使用CCD成像仪（VersaDoc MP 4000）和Quantity One软件（Bio-Rad）获得斑点图像。曝光时间为30秒。
参考资料： Selected references Gu et al. (2021) A Lipid Bodies-Associated Galactosyl Hydrolase Is Involved in Triacylglycerol Biosynthesis and Galactolipid Turnover in the Unicellular Green Alga Chlamydomonas reinhardtii Sharma et al. (2021) Simultaneous knockout of multiple LHCF genes using single sgRNAs and engineering of a high-fidelity Cas9 for precise genome editing in marine algae. Plant Biotechnol J. 2021 Mar 24. doi: 10.1111/pbi.13582. Epub ahead of print. PMID: 33759354. Pipitone et al. (2021). A multifaceted analysis reveals two distinct phases of chloroplast biogenesis during de-etiolation in Arabidopsis. Elife. 2021 Feb 25;10:e62709. doi: 10.7554/eLife.62709. PMID: 33629953; PMCID: PMC7906606. Khajuria et al. (2020). Photochemical Efficiency Is Negatively Correlated With the ? 9- Tetrahydrocannabinol Content in Cannabis Sativa L. Plant Physiol Biochem. 2020 Apr 8;151:589-600. doi: 10.1016/j.plaphy.2020.04.003.
Agrisera公司提供的植物领域的抗体涵盖拟南芥、莱茵衣藻、蓝藻、松柏类、硅藻、大豆、大麦、蒺藜苜蓿等等。艾美捷科技是Agrisera的中国代理商，为科研工作者提供优质的PsbA|D1 protein of PSII。 |
