DNA Fragment Purification Kit MagExtractor® -PCR & Gel Clean up-
使用说明书 (Code No. : NPK – 601) TOYOBO CO. , LTD.Biochemical Operation Department OSAKAJAPAN —目录— [1] 前言 ........................................................................................... 1 [2] 纯化流程...................................................................................... 2 [3] 试剂盒中所包含的物品................................................................. 3 [4] 试剂盒以外所需要的其他物品...................................................... 3 [5] 回收DNA溶液............................................................................. 4 [6] 回收琼脂糖凝胶........................................................................... 5 [7] 疑难解答...................................................................................... 8
注意： 本试剂盒中所包含的都是研究用试剂。请不要用于诊断，临床等场合。在使用本试剂盒的时候，请严格遵守实验室的基本注意事项，注意安全。由于本试剂盒内含有对人体有害的试剂，所以请务必严格遵守各试剂的相关使用说明书，按要求使用保护罩等防护措施。
[1] 前言 MagExtractor - PCR & Gel Clean up-利用在Chaotropic（盐）试剂存在的情况下，核酸能吸附在硅胶上的特性1），用于手动对DNA片段进行纯化。本试剂盒采用磁硅胶粒子，若使用磁性台架，则能最大限度地减少复杂的离心操作，能够快速地的纯化DNA片段。 1)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76(2) 615-619(1979) 特征
试剂盒的用途
回收的DNA的用途
[2] 纯化流程 下图显示为使用MagExtractor-PCR & Gel Clean up-时的纯化流程。
[3] 试剂盒中所包含的物品
本试剂盒中包含以下试剂。（200次份）
*吸附液，洗净液在低温情况下会析出结晶。请一边用手捂暖，一边 将其倒转混合让结晶溶解后使用。另外，吸附液及洗净液内含有蛋白 变性剂。在使用时务必注意，万一沾到身体，请立刻用清水冲洗。
[4] 试剂盒以外所需要的其他物品
1．试剂 ·灭菌蒸馏水<溶出液> ·75％乙醇<洗净用>
2．器具，器材 ·1.5ml小型试管用磁性台架 ·简易台式离心机 ·漩涡混合器 ·Heat Block 55℃（用于在需要去除混于回收液中的乙醇的场合）
*可使用本公司的磁性台架Magical Trapper（Code No.：MGS-101）等产品。
[5] 回收DNA溶液 2．操作程序 DNA溶液（100μl）1） ↓← 400μl吸附液 ↓← 30μl磁珠2) ↓不时用漩涡混合器搅拌，并放置约1～2min（室温） B/F（固/液）分离3） ↓←（600μl洗净液）4） ↓漩涡混合器搅拌10sec， B/F分离。3） ↓←1ml75％乙醇4） ↓漩涡混合器搅拌10sec， B/F分离。3） 瞬时高速离心，彻底去除上清部分。 （打开小型试管的盖子，55℃下放置5min，干燥）4） ↓←25～100μl蒸馏水 ↓漩涡混合器搅拌10sec， （在无法充分将粒子分离的情况下，请用pipetting来分离粒子。） ↓放置2min B/F分离，回收上清液。5）
1）请尽量不要含矿物油。 2）使用磁珠前，请彻底悬浊混合后再使用。 3）将试管放置在磁性台架上，把磁珠挪近磁石，用微量移液器持续去除 上清部分。通过乙醇清洗时，可以通过将上清液倒入其他容器进行去除。 B/F分离时推荐使用对应于微型试管的磁性台架，但也可用简易台式离心机，用大约6,000r.p.m程度，5sec.的离心进行分离。g会根据离心机的转子口径而发生变化，所以请调整旋转数，使得能更有效地集合粒子，并保证凝结不至于过度。 4）请参照3.的表。 5）回收液中少量混入的磁珠并不会有碍下一次的反应，但在测定吸附度 等场合时，请通过瞬时高速离心除去磁珠。
3．关于工序的省略，纯化规模 ·洗净工序，加热工序可以省略（请参照下表）
·根据DNA溶液的量，可以按比例减少本试剂盒中附带的吸附液、洗净 液和磁珠的使用量。此时，无需减少75％乙醇溶液的使用量。
[6] 回收琼脂糖凝胶 1．前言 ·本操作程序适用于从TAE或者TBE琼脂糖凝胶（约0.3g）中回收 DNA片段。本操作程序是以琼脂糖浓度2％以下的凝胶为对象。 要使用2％以上的凝胶时，推荐所使用凝胶的量少于0.3g。另外，本 操作程序不需要使用特殊的低融点琼脂糖凝胶。 ·能够回收的DNA大小约为100bp～50kbp。 ·回收后的DNA主要用于连接反应、标记、测序等反应。
2．操作程序 琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色。 ↓ 在UV照射下（Long wave），为了使得目标条带尽可能地变小，使 用切割刀或手术刀等进行切开。 ↓ 把切开的琼脂糖切细，放到1.5ml小型试管中。（此时称得重量，如 果大于0.3g则分几次进行。）1） ↓←400μl吸附液 在凝胶完全溶解之前，将其放置在室温中，并不时进行搅拌。2） ↓←30μl磁珠3） ↓经常用漩涡混合器搅拌，并放置2min（室温）， B/F分离。4） ↓←600μl洗净液 ↓漩涡混合器搅拌10sec， B/F分离。4） ↓←1ml75％乙醇溶液5） ↓漩涡混合器搅拌10sec， B/F分离。4） 瞬时高速离心，彻底去除上清部分。 （打开微型试管的盖子，55℃下放置5min，干燥）5）
↓←25～100μl蒸馏水 ↓漩涡混合器搅拌10sec （在无法充分分开粒子的情况下，请用pipetting来分散粒子。） ↓放置2min B/F分离，回收上清液6）
1） 将琼脂糖凝胶制成切片，以利于溶解。 2） 如果想要快速溶解琼脂糖凝胶或凝胶难以溶解时，请加温至55℃ 5min。 3） 使用磁珠前，请彻底混合后再使用。 4） 将试管放置在磁性台架上，把磁珠挪近磁石，用微量移液器持续去 除上清部分。要洗净乙醇，也可以通过将上清液倒入其他容器来去除。 B/F分离时推荐使用对应于微型试管的磁性台架，但也可使用简易台式离心机，用大约6,000r.p.m程度，5sec.的离心进行分离。g会根据离心机的转子口径而发生变化，故请调整旋转数，使得更有效地集合粒子，并保证凝结不至于过度。 5） 请参照3.的表。 6） 回收液中混入少量磁珠并不会有碍下一次的反应，但在测定吸附 度等场合时，请通过瞬时高速离心除去磁珠。
3．关于工序的省略，纯化规模 ·洗净工序，加热工序可以省略（请参照下表）
*从琼脂糖凝胶中回收核酸时，必须用洗净液清洗。
·根据DNA溶液的量，可以按比例减少本试剂盒中附带的吸附液、洗净 液和磁珠的使用量。此时，无需减少75％乙醇溶液的使用量。
[7] 疑难解答 1．回收量低
2．回收的核酸的吸光度不准确
3．回收后的核酸不能良好地进行反应
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